Lyonia:
a journal of ecology and application


Analysis of the presence of the fungus Batrachochytrium dendrobatidis Bd. in the Amphibian populations of 8 localities in the southern Ecuadorian Andes.
Análisis de hongo Batrachochytrium dendrobatidis Bd., en las poblaciones de anfibios de 8 localidades de los andes sur del Ecuador.

Freire, Diana1; Fernández, Carla1; Nogales, Fernando2
1 Tesis de Ingeniería Ambiental – U. T. P. L, [email protected], [email protected]
2 Escuela de Ciencias Ambientales – U. T. P. L, [email protected]
Resumen 
En Ecuador existen 421 especies de anfibios, lo que lo convierte en el tercer país más diverso del mundo. En la última década esta diversidad se ha visto amenazada, en Ecuador algunos autores reportan la Chytridiomycosis, que es una enfermedad mortal que ataca la piel de los anuros, como una de las posibles causas. Sin embargo en la Región Sur, Loja y Zamora Chinchipe no existen estudios del B. dendrobatidis sobre la declinación de anfibios, es así que este estudio pretende identificar la presencia de agentes patógenos como el B. dendrobatidis. El análisis de la Chytridiomycosis se realizó en cortes de secciones de piel: parche pélvico y patas a través de rutinas histológicas de cortes transversales de tres micras, teñidas con hematoxilina y eosina; la identificación se realizó en microscopio óptico. Fueron analizados un total de 62 especimenes de 8 localidades diferentes, ubicadas en Loja y Zamora, los especimenes fueron clasificados en posibles positivos y negativos. Los 12 especimenes posibles positivos fueron llevados al Laboratorio de herpetología de la PUCE, resultando negativos. Es importante que los 12 especimenes que se sospecha portan la Chytridiomycosis, sean analizados por otros tipos de diagnóstico, como por ejemplo: por otros hongos, envenenamiento por químicos, parásitos, virus, para tratar de determinar otros agentes asociados a la declinación de los anfibios.
Abstract 
There are 421 amphibian species in Ecuador, which makes the country the third most diverse country in the world. In the last decade, this diversity has been threatened, in Ecuador some authors report Chytridyomicosis, which is a letal illness attacking amphibian skin, as a possible cause. However in the Southern Region, Loja and Zamora Chinchipe there aren´t studies on B. Dendrobatidis about amphibian´s declination, therefore this study is willing to identify the presence of patogen agents as B. Dendrobatidis. Chytridiomycosis analysis was made by cutting skin sections: pelvic patch and paws by means of histologycal rutins of 3 microns transversal cutting, stained with hematoxiline and eosine; optical microscope was used for identification. 62 specimens from 8 different localities placed in Loja and Zamora were analyzed. Specimens were classified in possible positive and negative ones. Twelve possible positive specimens were taken to PUCE´S Herpetology Laboratory and they resulted negative. It is remarkable that those 12 specimens suspected to host Chytridiomycosis should be analyzed with other diagnosis types, for example: other fungus, chemical poisoning, parasites, viruses, to try to determine other associated agents to amphibian declination.
Introducción 



Ecuador tiene una densidad de 0.016 especies / Km2, lo que lo hace tres veces mas diverso que Colombia y 21 veces mas que Brasil (Coloma & Quiguango 2000). La información de la ultima década sugiere que al menos 26 especies de anfibios del Ecuador han disminuido (Ron et al. 2000). Las razones para esta crisis de la biodiversidad no son claras. Las declinaciones han ocurrido donde no es evidente la destrucción del hábitat.(Pounds & Crump 1994).
En Ecuador el número de especies desaparecidos es alto, sin embargo por parte de la comunidad científica, la atención prestada es mínima y no existen publicaciones científicas especificas sobre el tema a pesar de que el numero de especies es potencialmente elevado y es comparable al de países como Costa Rica o Panamá en donde han recibido bastante atención. (Pounds & Crump 1994).


Una de las especies con ejemplo más claro de declinación, es el jambato, Atelopus ignescens (Coloma et al. 2000, Ron et al. 2001), era uno de los sapos más comunes y ampliamente distribuidos en las zonas altas del Ecuador, abarcando las provincias, de Imbabura, Pichincha, Cotopaxi, Napo, Chimborazo y Bolívar. Para la Región Sur del Ecuador, Loja – Zamora Chinchipe, existe evidencia de declinación de anfibios en géneros como: Telmatobius, Atelopus, Bufo; sin embargo no existen estudios para determinar las posibles causas de esta declinación; por esta razón se cree pertinente el estudio de esta enfermedad, para lo cual han sido seleccionadas las siguientes localidades: Bosque Aguirre, San Luis - Parque Nacional Podocarpus (PNP), Palanda, Utuana, Chorrillos, San Francisco, Zamora Huayco, Espíndola - Páramo de Amaluza.


Recientemente se ha identificado al Hongo Quitridio del género Batrachochytrium (Longcore et al. 1999) que infecta a los anfibios y puede haber sido el causante de su muerte en Australia, Sudamérica, América Central y los Estados Unidos (Berger et al. 1998, Pessier et al. 1999, Daszak et al. 1999, Lips 1999). La más común causa de muerte en los anfibios de Australia es el hongo quitridio (Berger et al. 1999) y también ha sido encontrado en menor proporción en anfibios saludables y en renacuajos (Berger et al. 1999).


Chytridyomicosis es considerada una enfermedad infecciosa emergente (Daszak et al. 2000). Los efectos de B. dendrobatidis en algunas poblaciones de anfibios ha sido devastadora, Esta declinación esta siendo investigada por herpetólogos, ecologistas y epidemiólogos.


Siendo así la presente investigación pretende contribuir, considerando la enfermedad mitótica Chytridiomycosis como posible agente causal (Berger et al. 1998, 1999a) Desde el año 1998 en el Museo de la PUCE se iniciaron investigaciones y se han detectado agentes patógenos, siendo así, una especie hace poco descrita de hongo quitridio, Batrachochytrium dendrobatidis (Bd), se cree es la responsable de la extinción de poblaciones y especies de anfibios en el mundo. Este hongo se encuentra en todos los medios de vida, y particularmente en áreas bien conservadas ya que son muy sensibles a la contaminación. Sin embargo, la especie que afecta a los anfibios es de reciente descripción, siendo el primer caso de hongo quitridio que afecta a un vertebrado. (Garner et al. 2005).


Las poblaciones de anfibios afectadas por esta especie de hongo, generalmente desaparecen en pocos meses, siguiendo el patrón de dispersión típico de las enfermedades infecciosas. Los adultos mueren rápidamente mientras que las larvas, que infectan sólo en la zona bucal, mueren más tarde cuando la queratina (y con ella los hongos) se extiende por todo su cuerpo al completar la metamorfosis. Una vez que el hongo ha aparecido en una zona permanece en el medio como saprófito, incluso cuando los anfibios ya han desaparecido. (Garner et al. 2005)

La causa última de la muerte de los animales infectados aún no se conoce con seguridad, pero sí el desarrollo de la enfermedad (conocida como quitridiomicosis), que afecta a la superficie de la piel, y nunca a los órganos internos. Cuando las zooesporas de estos hongos entran en contacto con la piel de los anfibios se fijan, y a los pocos días se desarrollan esporangios que generan nuevas zooesporas. (Garner et al. 2005).
La Chytridiomycosis se diagnosticó en secciones de piel teñidas con técnicas estándar de hematoxilina y eosina (Berger et al. 1999b)




Materiales y Métodos 

Basada en dos fases, detalladas de la siguiente forma:





Se inició con la revisión del material a ser diagnosticado, es decir con las colecciones de anfibios, obtenidas entre los años 2003 y 2005 por el Blgo. Fernando Nogales, estas colecciones fueron de 8 localidades diferentes, ubicadas en Loja y Zamora Chinchipe. Esta información fue almacenada en una base de datos que contenía la siguiente información básica obtenida en el campo: Localidad, fecha, hora (inicio - final), tiempo de muestreo, Noche, Transecto, Investigadores. E información que describió a los especimenes colectados así: Numero, Familia, Nombre Científico, Altura, Sustrato (hoja, arroyo),Actividad, Observaciones.
Se continuó con la Catalogación y Etiquetación de las colecciones realizadas, así los datos fueron escritos con tinta permanente sobre papel resistente al alcohol, se usó hilo de algodón para atar la etiqueta, la cual fue colocada en la extremidad posterior del espécimen, la información detallada en las etiquetas contenía lo siguiente:
- Número de campo (Designación única de la muestra)
- Iniciales del Colector
- Iniciales del patógeno a ser analizado Batrachochytrium dendrobatidis (BD)





Rutina Histológica E Identificación del hongo
Para realizar el análisis de Batrachochytrium dendrobatidis las colecciones fueron conservadas en frascos con formol al 70%. Se realizó cortes con bisturí de secciones de piel: parche pélvico y patas, las secciones fueron colocadas en cajas plásticas pequeñas utilizadas para procesos histológicos.
Inclusión en Parafina: las muestras de tejidos fueron colocadas en las cajas, se llenaron de parafina, formando un bloque macizo, con el uso del Microtomo a través de rutinas histológicas de cortes transversales de tres micras, se obtuvieron las placas con las muestras de tejido.
Tinción con Hematoxilina y Eosina
Procedimiento de Hematoxilina y Eosina de MAYER (Hall et al. 1993)
Procedimiento de Giemsa (Brown et al. 1993)
Identificación: Se realizó en microscopio óptico.





Resultados 





Fueron analizados un total de 62 especimenes. Correspondientes a las siguientes familias: Leptodactilidae con los géneros Eleutherodactulus, Prinophus, Phylionastes; Hylidae con los géneros: Philomedusa e Hyla; Bufonidae con el género: Bufo; Centronelidae con el género Cocranella; y Dendrobatidae con el género: Colosthetus (Fig 1.), encontrados en las 8 localidades diferentes: Bosque Aguirre, San Luis - Parque Nacional Podocarpus (PNP), Palanda, Utuana, Chorrillos, San Francisco, Zamora Huayco, Espíndola - Páramo de Amaluza. ubicadas en Loja y Zamora, (Fig. 2.)



Figura 1. Familas registradas en el Sur de Ecuador.




Figura 2. Mapa de la zona de estudio.



Los resultados fueron clasificados en posibles positivos y negativos. Resultando como negativos 50 especimenes (Anexo 1.) y como posibles positivos 12 especimenes los cuales fueron llevados al Laboratorio de herpetología de la PUCE, resultando negativos para Chytridiomycosis. (Tabla 1.)




Discusión 



Las declinaciones en las poblaciones de anfibios han involucrado también a varias especies de las zonas altas de los Andes del Ecuador (Coloma 1992, 1995, 1996; Vial & Sailor 1993, Stebbins & Cohen 1995, Lotters 1996, Coloma et al. 2000).
Cabe resaltar que según el estudio realizado sobre Chytridiomycosis para el Ecuador, la distribución de especimenes positivos en ese estudio, abarca desde el Páramo del Volcán Chiles en la Provincia de Carchi, al norte, hasta las lagunas del Parque Nacional Cajas, al Sur. (Ron & Merino-Viteri 2000) Es importante considerar que la colección mas antigua para Chytridiomycosis es de Atelopus bomolochos recolectado el 1 de diciembre de 1980, mientras que el mas reciente corresponde a Gastrotheca pseustes colectados como renacuajos el 8 de septiembre de 1999 y metamorfosearon en condiciones de laboratorio. (Merino- Viteri 2001).


Sin embargo es importante tomar en cuenta que según los resultados obtenidos, los 12 especimenes sospechosos para Chytridiomycosis (Tabla. 1), Presentan anormalidades comparativas a una piel sana; como es el caso del Número BD 00021, Eleutherodactylus,
No. BD 00066, Bufo, que presentan desprendimiento en la piel y formación de bulbos, así mismo en el resto de placas se presentan características anormales en la piel, las cuales fueron apreciadas en el microcopio (Fig. 3 A. B. C:) Por la tanto el diagnostico de estos especimenes, debe ser considerado para otros tipos de diagnósticos, como por ejemplo por otros hongos, bacterias, envenenamiento por químicos, etc., para tratar de determinar otros agentes asociados a la declinación de los anfibios.



Figura 3. A. Fotografía de la piel de un anfibio Número BD 00021, Eleutherodactylus, presenta estructuras diferentes observadas a la de una piel normal, B. Fotografía de la piel de un anfibio No. BD 00066, Bufo, presenta desprendimiento de la piel y formación de un bulbo. C. Fotografía B usando lente de mayor aumento. Fotos: Diana Freire



A pesar de que los especimenes que resultaron positivos para Chytridiomycosis fueron los obtenidos en museos de historia natural, o colecciones obtenidas entre los años 80 y 90, se consideró de suma importancia realizar un estudio de contribución en la Región Sur, en donde existe evidencias de declinación de Anfibios en las poblaciones de Atelopus, Bufo y Telmatobius, sin embargo no existe mayor atención y escasa información al respecto.
Probablemente ésta enfermedad exista en otras localidades, en tanto no se podría afirmar su ausencia, más bien se deberían realizar más investigaciones tomando en cuenta las enfermedades patógenas y diversos causas.


Cabe resaltar que entre otras, las causas asociadas a la declinación de anfibios son las siguientes: cambio climático, radiación ultravioleta, especies introducidas, uso de agroquímicos, y la citada en la presente investigación en lo que se refiere a enfermedades patógenas, posiblemente estas podrían dar como resultado un proceso de SINERGISMO, en donde la interacción de todos estos patrones podrían estar provocando un aumento drástico en la declinación de anfibios.


Conclusiones 



Existe evidencia que el hongo Batrachochytrium dendrobatidis, esta presente en el Ecuador desde los años 80. Y que esta asociado en las declinaciones de Anfibios en Sudamérica y en todo el mundo.
Los 50 especimenes colectados para el análisis de B. dendrobatidis, en las 8 localidades estudiadas, fueron diagnosticados como negativos para la Chytridiomycosis.
Se encontraron estructuras anormales a las de la piel normal de un anfibio como: desprendimiento, formación de bulbos.
Posiblemente pueden existir la enfermedad en otras localidades, por lo que para confirmar se deben realizar mas investigaciones.







Se recomienda la recolección de especimenes de museos para analizar el B. dendrobatidis, y su posible vinculo con las declinaciones en los géneros: Atelopus, Telmatobius, Hyla.
También se recomienda que según los resultados obtenidos, los especimenes sean analizados tomando en cuenta la posible infección por otros hongos, bacterias o diferentes agentes patógenos.
Es importante revisar las tinciones especificas para investigaciones realizadas para hongos, esto facilitara el trabajo al momento de la identificación.
Se debería fomentar el interés por parte de la comunidad científica y la comunidad en general sobre la declinación de anfibios, que es un problema que va en aumento.
Además ya que se observo la venta libre de rana toro en la ciudad de Loja, se debería considerar para controlar a través de los organismos encargados la prohibición de estos.




Agradecimientos 



Un Agradecimiento especial al Blgo. Fernando Nogales por los conocimientos impartidos, auspicio económico y facilitar los especimenes para el análisis del B. dendrobatidis.
A Don Church – Conservación Internacional
A P. Barrazueta por la valiosa colaboración en la etapa de Laboratorio
A Dr. R. Saa por la colaboración en la fase de diagnóstico
Blgo. Juan Pablo Suárez por la colaboración para el material fotográfico

A A. Merino-Viteri por compartir su experiencia en el estudio de B. dendrobatidis


Referencias 



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4



Anexo 



Tabla 1. Especimenes diagnosticados como posible positivos para Chytridiomycosis, ordenados por Número de Análisis del Batrachochytrium dendrobatides (No. BD)



No BD Colección Familia Genero Provincia Localidad
Altitud (msnm) Tinción Resultado Observaciones

02

09/07/04

Leptodactylidae

Eleutherodactylus

Loja

Bosque
Aguirre

2800

Hematoxilina

Negativo

características
anormales











10

09/07/04

Leptodactylidae

Eleutherodactylus

Loja

Bosque
Aguirre

2800

Hematoxilina

Negativo

bulbo











17

29/04/03

Leptodactylidae

Eleutherodactylus

Zamora
Chinchipe

San Luis

1220

Hematoxilina

Negativo

piel
desprendida











21

29/04/03

Leptodactylidae

Eleutherodactylus

Zamora
Chinchipe

San Luis

1220

Hematoxilina

Negativo

piel
desordenada











33

23/01/05

Hylidae

Philomedusa

Zamora
Chinchipe

Palanda

1609

Hematoxilina

Negativo

bulbo

ß










43

28/01/05

Leptodactylidae

Eleutherodactylus

Zamora
Chinchipe

Palanda

1609 .

Hematoxilina

Negativo

características
anormales











49

25/01/05

Leptodactylidae

Eleutherodactylus

Zamora
Chinchipe

Palanda

1609

Hematoxilina

Negativo

características
anormales











66

28/01/05

Bufonidae

Bufo

Zamora
Chinchipe

Palanda

1609

Hematoxilina

Negativo

características
anormales











71


Leptodactylidae

Eleutherodactylus

Zamora
Chinchipe

Utuana

2340

Hematoxilina

Negativo

piel
desprendida











83

12/12/04

Leptodactylidae

Eleutherodactylus

Zamora
Chinchipe

Chorrillos

1840

Hematoxilina

Negativo

características
anormales











93

29/04/03

Leptodactylidae

Eleutherodactylus

Zamora
Chinchipe

San Luis PNP

1220

Hematoxilina

Negativo

piel
desprendida











94

30/04/03

Leptodactylidae

Eleutherodactylus

Zamora
Chinchipe

San Luis PNP

1220

Hematoxilina

Negativo

características
anormales






ANEXOS:
Anexo 1. Total de especies colectados entre los años 2003 y 2005 para el análisis de B. Dendrobatidis
Observaciones: Para verificar y aprovechar el material colectado en el campo se tomó en cuenta especimenes obtenidos en el Bosque Colorado - Puyango y también obtenidos en tiendas de mascotas de la localidad de Loja.





















































No Indi- viduo No BD Familia Genero Provincia Localidad
Altitud Tincion Resultado

1

1

Leptodactylidae

Eleutherodactylus

Loja

Bosque
Aguirre

2800 msnm

Hematoxilina & Eosina

Negativo

2

2

Leptodactylidae

Eleutherodactylus

Loja

Bosque
Aguirre

2800 msnm

Hematoxilina & Eosina

Negativo

3

4

Leptodactylidae

Eleutherodactylus

Loja

Bosque
Aguirre

2800msnm

Hematoxilina & Eosina

Negativo

4

5

Leptodactylidae

Eleutherodactylus

Loja

Bosque
Aguirre

2800 msnm

Hematoxilina & Eosina

Negativo

5

6

Leptodactylidae

Eleutherodactylus

Loja

Bosque
Aguirre

2800 msnm

Hematoxilina & Eosina

Negativo

6

8

Leptodactylidae

Eleutherodactylus

Loja

Bosque
Aguirre

2800 msnm

Gram

Negativo

7

9

Leptodactylidae

Eleutherodactylus

Loja

Bosque
Aguirre

2800 msnm

Hematoxilina & Eosina

Negativo

8

10

Leptodactylidae

Eleutherodactylus

Loja

Bosque
Aguirre

2800 msnm

Hematoxilina & Eosina

Negativo

9

11

Leptodactylidae

Eleutherodactylus

Loja

Bosque
Aguirre

2800 msnm

Hematoxilina & Eosina

Negativo

10

14

Leptodactylidae

Eleutherodactylus

Zamora
Chinchipe

San Luis

1220 msnm

Hematoxilina &
Eosina

Negativo

11

16

Leptodactylidae

Eleutherodactylus

Zamora
Chinchipe

San Luis

1220 msnm

Hematoxilina &
Eosina

Negativo

12

17

Leptodactylidae

Eleutherodactylus

Zamora
Chinchipe

San Luis

1220 msnm

Hematoxilina & Eosina

Negativo

13

21

Leptodactylidae

Eleutherodactylus

Zamora
Chinchipe

San Luis

1220 msnm

Hematoxilina & Eosina

Negativo

14

22

Leptodactylidae

Eleutherodactylus

Zamora
Chinchipe

San Luis

1220 msnm

Hematoxilina & Eosina

Negativo

15

24

Leptodactylidae

Eleutherodactylus

Zamora
Chinchipe

San Luis

1220 msnm

Hematoxilina & Eosina

Negativo

16

28

Leptodactylidae

Eleutherodactylus

Zamora
Chinchipe

Palanda

1609 msnm

Hematoxilina & Eosina

Negativo

17

33

Hylidae

Philomedusa

Zamora
Chinchipe

Palanda

1609 msnm

Hematoxilina & Eosina

Negativo

18

42

Leptodactylidae

Eleutherodactylus

Zamora
Chinchipe

Palanda

1609 msnm

Hematoxilina & Eosina

Negativo

19

43

Leptodactylidae

Eleutherodactylus

Zamora
Chinchipe

Palanda

1609 msnm

Hematoxilina & Eosina

Negativo

20

45

Bufonidae

Bufo

Zamora
Chinchipe

Palanda

1609 msnm

Hematoxilina & Eosina

Negativo

21

49

Leptodactylidae

Eleutherodactylus

Zamora
Chinchipe

Palanda

1609 msnm

Hematoxilina & Eosina

Negativo

22

54

Leptodactylidae

Eleutherodactylus

Zamora
Chinchipe

Palanda

1609 msnm

Hematoxilina & Eosina

Negativo

23

55

Hylidae

Philomedusa

Zamora
Chinchipe

Palanda

1609 msnm

Giemsa, Gram,
Hematoxilina

Negativo

24

57

Leptodactylidae

Eleutherodactylus

Zamora
Chinchipe

Palanda

1609 msnm

Hematoxilina & Eosina

Negativo

25

58

Centrolenidae

Cocranella

Zamora
Chinchipe

Palanda

1609 msnm

Hematoxilina & Eosina

Negativo

26

62

Leptodactylidae

Eleutherodactylus

Zamora
Chinchipe

Palanda

1609 msnm

Hematoxilina & Eosina

Negativo

27

65

Leptodactylidae

Eleutherodactylus

Zamora
Chinchipe

Palanda

1609 msnm

Hematoxilina & Eosina

Negativo

28

66

Bufonidae

Bufo

Zamora
Chinchipe

Palanda

1609 msnm

Hematoxilina & Eosina

Negativo

29

69

Leptodactylidae

Eleutherodactylus

Zamora
Chinchipe

Utuana

2340 msnm

Hematoxilina & Eosina

Negativo

30

70

Leptodactylidae

Phrinopus

Zamora
Chinchipe

Utuana

2340msnm

Hematoxilina & Eosina

Negativo

31

71

Leptodactylidae

Eleutherodactylus

Zamora
Chinchipe

Utuana

2340msnm

Hematoxilina & Eosina

Negativo

32

74

Leptodactylidae

Eleutherodactylus

Zamora
Chinchipe

Utuana

2340msnm

Hematoxilina & Eosina

Negativo

33

75

Leptodactylidae

Eleutherodactylus

Zamora
Chinchipe

Utuana

2340 msnm

Hematoxilina & Eosina

Negativo

34

76

Leptodactylidae

Eleutherodactylus

Zamora
Chinchipe

Chorrillos

1840 msnm

Hematoxilina & Eosina

Negativo

35

77

Leptodactylidae

Eleutherodactylus

Zamora
Chinchipe

Chorrillos

1840 msnm

Hematoxilina & Eosina

Negativo

36

78

Leptodactylidae

Eleutherodactylus

Zamora
Chinchipe

Chorrillos

1840 msnm

Hematoxilina & Eosina

Negativo

37

81

Centrolenidae

Cocranella

Zamora
Chinchipe

Chorrillos

1840 msnm

Hematoxilina & Eosina

Negativo

38

82

Leptodactylidae

Eleutherodactylus

Zamora
Chinchipe

Chorrillos

1840 msnm

Hematoxilina & Eosina

Negativo

39

83

Leptodactylidae

Eleutherodactylus

Zamora
Chinchipe

Chorrillos

1840 msnm

Hematoxilina & Eosina

Negativo

40

86

Leptodactylidae

Eleutherodactylus

Zamora
Chinchipe

Chorrillos

1840 msnm

Hematoxilina & Eosina

Negativo

41

88

Leptodactylidae

Eleutherodactylus

Zamora
Chinchipe

Chorrillos

1840 msnm

Hematoxilina & Eosina

Negativo

42

93

Leptodactylidae

Eleutherodactylus

Zamora
Chinchipe

San Luis PNP

1220msnm

Hematoxilina & Eosina

Negativo

43

94

Leptodactylidae

Eleutherodactylus

Zamora
Chinchipe

San Luis PNP

1220msnm

Hematoxilina & Eosina

Negativo

44

95

Leptodactylidae

Eleutherodactylus

Zamora
Chinchipe

San Luis PNP

1220msnm

Hematoxilina & Eosina

Negativo

45

96

Leptodactylidae

Eleutherodactylus

Zamora
Chinchipe

San Luis PNP

1220msnm

Hematoxilina & Eosina

Negativo

46

98

Leptodactylidae

Eleutherodactylus

Zamora
Chinchipe

San Francisco

2160msnm

Hematoxilina & Eosina

Negativo

47

99

Leptodactylidae

Eleutherodactylus

Zamora
Chinchipe

San Francisco

2160msnm

Hematoxilina & Eosina

Negativo

48

00100

Leptodactylidae

Eleutherodactylus

Zamora
Chinchipe

San Francisco

2160msnm

Hematoxilina & Eosina

Negativo

49

00101

Bufonidae

Bufo

Loja

Zamora
Huayco

3220 msnm

Hematoxilina & Eosina

Negativo

50

00103

Bufonidae

Bufo

Loja

Zamora
Huayco

3220msnm

Hematoxilina & Eosina

Negativo

51

00104

Leptodactylidae

Eleutherodactylus

Loja

Zamora
Huayco

3220msnm

Hematoxilina & Eosina

Negativo

52

00105

Dendrobatidae

Colosthetus

Puyango

Bosque El Colorado

1800 msnm

Hematoxilina & Eosina

Negativo

53

00106

Leptodactylidae

Eleutherodactylus

Puyango

Bosque El Colorado

1800 msnm

Hematoxilina & Eosina

Negativo

54

00107

Hylidae

Hyla

Puyango

Bosque El Colorado

1800 msnm

Hematoxilina & Eosina

Negativo

55

00108

Hylidae

Hyla

Puyango

Bosque El Colorado

1800 msnm

Hematoxilina & Eosina

Negativo

56

00109

Leptodactylidae

Eleutherodactylus

Loja

Páramo de Amaluza

3480 msnm

Hematoxilina & Eosina

Negativo

57

00110

Leptodactylidae

Eleutherodactylus

Loja

Páramo de Amaluza

3480 msnm

Hematoxilina & Eosina

Negativo

58

00111

Leptodactylidae

Eleutherodactylus

Loja

Páramo de Amaluza

3480 msnm

Hematoxilina & Eosina

Negativo

59

00112

Centrolenidae

Cocranella

Loja

Loja

2063 msnm

Hematoxilina & Eosina

Negativo

60

00113

Centrolenidae

Cocranella

Loja

Loja

2063 msnm

Hematoxilina & Eosina

Negativo

61

00114

Bufonidae

Bufo

Loja

Loja

2063 msnm

Hematoxilina & Eosina

Negativo

62

00115

Bufonidae

Bufo

Loja

Loja

2063 msnm

Hematoxilina & Eosina

Negativo





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